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2020 年4 期 第35 卷

基础与实验研究 HTML下载 PDF下载

27nt-miRNA 通过靶向哺乳动物雷帕霉素靶蛋白调控血管平滑肌细胞凋亡及其分子机制研究

作者:李丹,杨鹏,滕红丽,颜渊鸳,罗雪兰,欧和生

单位:
530021 广西壮族自治区南宁市,广西医科大学 药学院(李丹、颜渊鸳、欧和生);广西中医药大学附属广西国际壮医医院 科技部 ( 杨鹏、滕红丽、罗雪兰)
关键词:
27nt-miRNA;血管平滑肌细胞;凋亡;哺乳动物雷帕霉素靶蛋白;磷酸化

摘要:

目的:探讨来源于一氧化氮合酶基因第四内含子的27 碱基重复序列微小RNA(27nt-miRNA)对哺乳动物雷帕霉 素靶蛋白(mTOR)介导的主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡调控作用及潜在分子机制。 方法:将大鼠主动脉VSMC 分为空白对照组、雷帕霉素组、27nt-miRNA 组、27nt-miRNA 反义序列(anti-27ntmiRNA) 组、阴性对照组。27nt-miRNA 组:转染27nt-miRNA 正义链慢病毒载体;anti-27nt-miRNA 组:转染27ntmiRNA 反义链慢病毒载体;阴性对照组:转染随机阴性序列慢病毒载体。除空白对照组外,雷帕霉素组与各转染组 细胞给予100 ng/ml 雷帕霉素诱导培养2 h 诱导凋亡。荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)验证27nt-miRNA 慢病毒稳转 细胞株构建情况;CCK-8 法、流式细胞术、qRT-PCR 法与蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测各组细胞增殖能力、 细胞凋亡率与周期分布以及mTOR、磷酸化-mTOR(p-mTOR)、B 淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2 相关X 蛋白(Bax) 和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的信使RNA(mRNA)和(或)蛋白表达水平。 结果:慢病毒转染VSMC 后,27nt-miRNA 稳转细胞株构建成功,雷帕霉素可抑制VSMC 的mTOR mRNA 与p-mTOR 蛋白表达水平。与阴性对照组相比,27nt-miRNA 组细胞的活力与增殖能力显著增强,且细胞凋亡率显著降低(P 均 <0.05),细胞周期G1 期向S 期分裂进程阻滞减弱(P <0.05);Bax 和caspase-3 蛋白表达量显著减少,Bcl-2 蛋白表达 量显著增加(P 均<0.05);mTOR 基因转录水平与p-mTOR 蛋白表达水平均下降(P <0.05)。 结论:27nt-miRNA 通过负调控mTOR 基因转录水平与蛋白磷酸化水平抑制VSMC 凋亡,其机制可能与上调 Bcl-2 蛋白表达,下调Bax 和caspase-3 蛋白表达有关。

参考文献:

刊名: 中国循环杂志
Chinese Circulation Journal
主办: 国家心血管病中心
周期: 月刊(自2013年9月起改为月刊)
创刊时间:1986年
出版地:北京市
语种: 中文
开本: 大16开
ISSN: 1000-3614
CN: 11-2212/R
邮发代号:82-212
单价:30元/本

该刊被以下数据库收录:
JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)(2012年计划收录)
中国科学引文数据库(CSCD—2008)
核心期刊:
中文核心期刊(2008)
中文核心期刊(2004)
中文核心期刊(2000)
中文核心期刊(1996)
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